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Thermo 離子交換色譜柱使用和維護(hù)說明
  • 發(fā)布日期:2020-01-09      瀏覽次數(shù):6185
    • 為了使您的色譜柱能發(fā)揮大的性能,敬請先閱讀以下說明:

      1、 適用類型

      Thermo 離子交換色譜柱包括:BioBasic AXSCX,Hypersil SAXHypersil Gold AX, SAX 等。

      2、 柱體積

      色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算:

      V = 0.68 πr2L

      V 為色譜柱柱體積(mL),r 為色譜柱內(nèi)徑(cm),L 為色譜柱長度(cm)。

      3、 色譜柱柱效測試與保存

      離子交換色譜柱出廠時都經(jīng)過柱效測試,請參考柱效報告。

      在條件允許情況下,請對新色譜柱進(jìn)行柱效測試。

      離子交換色譜柱出廠時均保存在乙醇溶液中(如有不同,以柱效報告為準(zhǔn))。

      4、 溫度

      所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃。

      5、 樣品

      建議將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,建議使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過濾。同時建議在色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。

      6、 流動相

      所用溶劑通常為水、乙腈、甲醇等,Thermo 的離子交換色譜柱可以 100%水為流動相, 進(jìn)行鹽的梯度洗脫。流動相中含有機(jī)相時,請注意降低鹽的濃度,以防止溶劑混合后鹽從流動相中析出。更換流動相時也要注意這一問題,可先用含較高純水的流動相除鹽過渡。請將流動相的 pH 值控制在 2-8。緩沖鹽濃度在 500 mM 以下。所有流動相,建議當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制,并使用 2μm 濾膜過濾。

      7、 色譜柱安裝

      請小心操作色譜柱。

      不要摔、碰色譜柱,這樣會損壞色譜柱床,使色譜柱性能下降。使用合適的連接管路和接頭,確保色譜柱連接處死體積降到低(使用不銹鋼接頭時需要尤其注意)。我們建議使用 SLIPFREE 接頭,此接頭與 Thermo 色譜柱以及其他品牌色譜柱均完美匹配。

      8、 色譜柱平衡

      新柱在使用前,請預(yù)先用 20 倍柱體積甲醇/或乙腈沖洗色譜柱,然后以初始流動相(不含鹽)沖洗 10 倍柱體積。在進(jìn)行正式分析之前,請使用至少 20 倍柱體積的流動相沖洗色譜柱,以使色譜柱達(dá)到平衡。

      9、 色譜柱保護(hù)

      對于成分復(fù)雜的“臟”樣品以及組分未知的樣品,請盡量使用在線濾器或保護(hù)柱,如果可能,使用 SPE 小柱對樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。

      10、 色譜柱清洗

      常規(guī)清洗:每天完成分析之后,用 100% 水沖洗 30 倍柱體積除鹽,然后用 20% 甲醇/或乙腈沖20 個柱體積,保存在 20% 甲醇/或乙腈中。

      清洗強(qiáng)保留污染物:如果發(fā)現(xiàn)離子交換色譜柱柱效出現(xiàn)大幅下降,可通過如下方法

      清洗離子交換色譜柱:首先用高濃度的緩沖鹽溶液清洗(濃度是流動相的 5-10 倍,但不得超過 1M),沖洗 30倍柱體積。用 100% 水沖洗 20 倍柱體積以除鹽后,再用 100%甲醇/或乙腈清洗 30 倍柱體積。后用 20%甲醇/或乙腈水溶液(不含鹽)保存。

      11、 色譜柱保存

      100水沖洗 30 倍柱體積除鹽后,若短期不使用(<1 周),用 20% 甲醇或乙腈沖20 倍柱體積后,保存在 20甲醇/或乙腈中;若需長期放置(>1周),用 50甲醇/乙腈沖洗 20 倍柱體積后,保存在 50% 甲醇/或乙腈中。

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